熒光標(biāo)記多肽技術(shù)指利用一些能發(fā)射熒光的物質(zhì)共價(jià)結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個(gè)基團(tuán)上,利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。 熒光,又作“螢光”,是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。當(dāng)某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長的入射光(通常是紫外線或X射線)照射,吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài),并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的的波長長的出射光(通常波長在可見光波段);而且一旦停止入射光,發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即消失。
具有這種性質(zhì)的出射光就被稱之為熒光。在日常生活中,人們通常廣義地把各種微弱的光亮都稱為熒光(多肽熒光標(biāo)記),而不去仔細(xì)追究和區(qū)分其發(fā)光原理。
利用熒光染料與被研究對象(蛋白、多肽等)吸附或共價(jià)結(jié)合后其熒光特性發(fā)生改變,從而反映有關(guān)研究對象性能的信息。
熒光標(biāo)記技術(shù):是把熒光基團(tuán)的共價(jià)鍵連接到蛋白、核酸等能夠識別分子物質(zhì)上的一種技術(shù)。這種技術(shù)通過了熒光的信號物質(zhì)的特定基團(tuán),與識別分子物質(zhì)的特定基團(tuán)反應(yīng),從而完成其標(biāo)記過程,利用標(biāo)記物的熒光特性,來提供被檢測對象的信號。熒光標(biāo)記方法具有如無放射性、操作簡單、高靈敏度和較好選擇性等優(yōu)點(diǎn)。
熒光標(biāo)記物種類多、標(biāo)記方法靈活,可應(yīng)用于多種生物大分子以及藥物的檢測。
熒光標(biāo)記試劑分類:在熒光標(biāo)記的技術(shù)中,常用的試劑有羅丹明類和熒光素類等,其它的熒光標(biāo)記試劑,還有多環(huán)芳烴的化合物、芳香雜環(huán)的化合物類以及一些稀土元素的螯合物等。
熒光染料標(biāo)記的多肽用于生物體內(nèi)生物醫(yī)學(xué)成像、蛋白結(jié)合和定位等的研究。熒光素可以直接和多肽的N端直接相連(異硫氰酸熒光素的連接, 通常在多肽的N端和異硫氰酸熒光素直接插一個(gè)氨基乙酸或者β-丙氨酸。),或者在C端和賴氨酸(或半胱氨酸)的側(cè)鏈連接、或者在其它可以連接的位子連接。